腺病毒載體構建及病毒包裝

詳細信息:

技術簡介:
      重組腺病毒(Adenovirus)是一種目前最高效可靠的重組病毒表達系統之一,可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白質。
其具備以下優點:
1. 宿主范圍廣:腺病毒除可感染一系列哺乳動物細胞,除可感染幾乎所有人的細胞類型外,還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
2. 因腺病毒的感染不依賴細胞周期,故其既可以感染增殖細胞也可以感染非增殖細胞。
3. 瞬時高效表達,不整合到基因組中。
4. 病毒滴度高,可用于動物水平的實驗。
 
服務內容:
1. 表達shRNA用重組腺病毒。
2. 基因過表達用重組腺病毒。
實驗步驟及周期:
1. 將目的基因插入腺病毒重穿梭質粒中。
    實驗周期為8個工作日。
    如客戶要求對載體的特定部件有所要求而需進行特殊改造,則此步實驗路線及實驗周期另行規定。
2. 將目的基因轉移至腺病毒骨架中。
 實驗周期為8個工作日。
3. 將確定正確的重組腺病毒質粒包裝出毒并擴增至所需滴度。
    進行包裝及三輪擴增達到體外實驗所需的病毒滴度所需時間為30個工作日,如實驗需要進行體內實驗或是額外的病毒量,所帶來的實驗時間另行約定。
4. 對包裝出的重組病毒進行質檢。
    質檢包括對終產品病毒基因進行PCR以確認目的基因的存在,以及對病毒液進行無菌實驗,實驗周期為8個工作日。
 
客戶須知:
    1. 腺病毒的感染依賴于細胞表面的柯薩奇-腺病毒受體(CAR),雖然其可以感染多種宿主及大量的細胞株/系,仍有少量細胞因其表達不帶該受體而無法進行有效感染,客戶在確定是否采用重組腺病毒之前請先通過閱讀文獻或是預實驗來確定實驗的目標基細胞可被腺病毒感染。
    2. 本公司目前不提供對致癌基因及毒基因等對人體有危害的基因的包裝服務。
    3. 如客戶所需包裝的目的基因由客戶提供,則要求客戶提供所要構建腺病毒的目的shRNA/基因的序列及其它相關說明信息,所在的載體的圖譜及序列。
    4. 如客戶所需包裝的目的基因由客戶提供,則客戶需要提供足量高純度的質粒(>5ug,電泳圖清晰,達酶切測序要求)及本公司鑒定工作所需的材料。
    5. 本公司在收到客戶提供的材料后會在第二個工作日起開始鑒定工作,鑒定的時間不包括在腺病毒包裝制備的時間內。
    6. 客戶應對所提供的材料及信息負責,如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。
 
服務承諾:
    1. 默認情況下本公司提供的病毒量為1ml滴度>109PFU/ml(部分病毒可能因其插入片段本身的毒副影響而對重組腺病毒的滴度有所影響),如需更多量的病毒請具體再商洽。
    2. 帶有穿梭質粒,重組腺病毒質粒酶切鑒定電泳圖,終產物PCR鑒定圖譜的實驗報告。測序,蛋白表達鑒定等實驗內容為可選服務,有需要的客戶請另行商定。
    3. 為了確保服務質量,合同周期為在實驗周期的基礎上加10個工作日。但通常情況下,全部服務會在合同約定周期前完成,在這種情況下,我們會提前將產品交付客戶使用。

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